Кариопатологические изменения амебоцитов дождевых червей Lumbricus rubellus под влиянием дизельного топлива
УДК 595.142.39
К. С. Козлов, Е. В. Антонова
Томский государственный университет, г. Томск, Россия, E-mail: ecology@green.tsu.ru
Любые изменения, производимые человеком в природе, в конечном счете, отражаются на почвенных животных. Они совершают работу огромного значения и составляют основу структуры сообществ наземных животных. Наиболее удобны в плане видов–индикаторов, которые больше всего отвечают целям экомониторинга, те почвенные животные, которые постоянно обитают на одном и том же участке, малоподвижные, с относительно длинным периодом индивидуального развития, при этом обладающих значительной численностью в различных местообитаниях и изученной биологией. Таковыми являются дождевые черви, обитающие в достаточно широком диапазоне экологических условий.
Цель работы – определить влияние дизельного топлива (летнего типа) на цитологические параметры ядерного аппарата Lumbricus rubellus (Hoffmeister, 1843). В рамках данной цели решались следующие задачи: определить изменения в уровне амебоцитов с кариопатологиями у L. rubellus (H.), подвергнутых воздействию дизельного топлива (летнего типа) по сравнению с интактным контролем; установить типы кариопатологий амебоцитов при воздействии на L. rubellus (H.) дизельного топлива (летнего типа); изучить влияние различных доз дизельного топлива (летнего типа) на кариопатологию амебоцитов у дождевых червей.
Для оценки влияния дизельного топлива (летнего типа) на дождевых червей использовались специально изготовленные кюветы из оргстекла (длина – 0,40 м, высота – 0,15 м, ширина – 0,02 м). Размеры лабораторных кювет обусловлены характером распределения дождевых червей по профилю почвы. В лабораторные кюветы помещался гумусовый слой (А1) серых лесных почв, зернисто-комковатой структуры, по одному килограмму (в среднем – 14-ти см слой) почвы в кювете. В каждую кювету также было помещено по 10 особей дождевых червей L. rubellus (H.). В каждом опыте было задействовано по 5 лабораторных кювет.
Эксперимент состоял из опытов на сплошное загрязнение почвенного профиля дизельным топливом (летнего типа). Загрязняющие вещества вносились в следующих концентрациях 2,5, 5, 7,5, 10 и 20 г дизельного топлива на 1 кг субстрата, при параллельном контроле. Загрязняющее вещество вносились в кюветы спустя одни сутки после помещения в них червей. Данный промежуток времени выделялся для адаптации червей к новым условиям обитания.
Дальнейшие исследования влияния сплошного загрязнения почвы дизельным топливом (летнего типа) заключалось в выяснении влияния этого палютанта на цитологические параметры ядерного аппарата L. rubellus (H.). В качестве критерия влияния использовались патологические изменения ядер амебоцитов крови L. rubellus (H.).
Из капли свежей крови приготавливали мазки. После нанесения мазка на предметное стекло его высушивали на воздухе и затем фиксировали в этаноле 10 минут. В данной работе окрашивание проводили по методу Романовского–Гимзе.
Цитологический анализ проводили на мазках крови с помощью микроскопа, при увеличении 7х90. Обследовано 26 мазков, на каждом из которых просмотрено по 200 клеток (всего проанализировано 5 200 клеток). Анализировалась пузырчатая шаровидная форма амебоцитов, так как в них четко видно ядро.
Данные цитологического анализа показывают, что в контрольной группе полностью отсутствуют такие патологии ядра, как дву- или многоядерная клетка с круглым ядром, клетки с микроядрами, апоптоз ядра в клетке и кольцевое ядро. Единичны дву- или многоядерные клетки с вытянутым ядром, ядра с выростами, безядерные клетки, а также патологии размазанного ядра. Более часто встречаются такие аномалии, как необычные, угловатые и бобовидные ядра. Основное количество в контроле представлено одноядерными клетками с округлым ядром. На втором месте по значимости стоят одноядерные клетки с вытянутым ядром. Значительное количество также представлено делящимися клетками.
Четко выраженная цитологическая нестабильность, проявляющаяся высоким уровнем амебоцитов с патологиями ядра, наблюдается во всех трех опытных группах клеток. Особенно высокий уровень измененных клеток наблюдается в группе подверженной воздействию дизельного топлива (летнего типа), и данные отличия имеют высокую степень достоверности.
Таким образом, поступление в организм Lumbricus rubellus (Hoffmeister, 1843) нефтепродуктов способствует увеличению мутагенно – измененных ядер амебоцитов в крови дождевых червей. Среди патологически измененных под воздействием нефтепродуктовамебоцитов преобладали клетки с овальной, веретеновидной и лопастной формами ядер. Наибольшие кариопатологические изменения в амебоцитах у данного вида наблюдались при использовании 7,5 г дизельного топлива на 1 кг почвы.
Zoocenosis — 2003
Біорізноманіття та роль зооценозу в природних і антропогенних екосистемах: Матеріали ІІ Міжнародної наукової конференції. – Дніпропетровськ: ДНУ, 2003. – С. 117-118.